Cách sử dụng máy HPLC

Published on Dec 20, 2018

"Hướng dẫn sử dụng phần mền EZchrom Elite đã được cài đặt hoàn thành cho hệ thống máy sắc ký lỏng HPLC CM 5000" //app.box.com/s/uro6fpr17jkeflrk...

Hình 1: Sơ đồ hệ thống HPLCTrong đó:1: Bình chứa pha động.2: Bộ phận khử khí3: Bơm cao áp4: Bộ phận tiêm mẫu5: Cộ sắc ký [pha tĩnh]6: Đầu dò7: Hệ thống máy tính có phần mềm ghi nhận tín hiệu, xử lý dữ liệu và điều khiển hệ thống.8: In dữ liệu.1.1. Bình chứa pha động :Máy HPLC thường có 4 đường dung môi vào đầu bơm cao áp cho phép chúng ta sử dụng 4bình chứa dung môi cùng một lần để rửa giải theo tỉ lệ mong muốn và tổng tỉ lệ của 4 đườnglà 100%.Tuy nhiên, theo kinh nghiệm, ít khi sử dụng 4 đường dung môi cùng một lúc mà thường sửdụng 2 hoặc 3 đường để cho hệ pha động luôn được pha trộn đồng nhất hơn, hệ pha động đơngiản hơn giúp ổn định quá trình rửa giải.Lưu ý: Tất cả dung môi dùng cho HPLC đều phải là dung môi tinh khiết sử dùng cho HPLC.Tất cả các hóa chất dùng để chuẩn bị mẫu và pha hệ đệm đều phải là hóa chất tích khiết dùngcho phân tích.Việc sử dụng hóa chất tinh khiết nhằm tránh hỏng cột sắc ký hay nhiễu đường nền, tạo nêncác peak tạp trong quá trình phân tích.1.2. Bộ khử khí DegasesMục đích sử dụng bộ khử khí nhằm lọai trừ các bọt nhỏ còn sót lại trong dung môi pha động,

tránh xảy ra một số hiện tượng có thể có như sau:




Tỷ lệ pha động của các đường dung môi không đúng làm cho thời gian lưu của peakthay đổi.Trong trường hợp bọt quá nhiều, bộ khử khí không thể lọai trừ hết được thì bơm caoáp có thể không hút được dung môi, khi đó ảnh hưởng đến áp suất và hoạt động của cả

hệ thống HPLC.

Trong các trường hợp trên đều dẫn đến sai kết quả phân tích.1.3. Bơm cao ápMục đích để bơm pha động vào cột thực hiện quá trình chia tách sắc ký. Bơm phải tạt đượcáp suất cao khỏang 250-600bar và tạo dòng liên tục. Lưu lượng bơm từ 0.1 đến 10ml/phút.1.4. Bộ phận tiêm mẫuĐể đưa mẫu vào cột phân tích theo với thể tích bơm có thể thay đồi.Có 2 cách đưa mẫu vào cột: bằng tiêm mẫu thủ công và tiêm mẫu tự động [autosamper].1.5. Cột sắc kýCột chứa pha tĩnh được coi là trái tim của của hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao.Cột pha tĩnh thông thường làm bằng thép không rỉ, chiều dài cột thay đổi từ 5-25cm đườngkính trong 1-10mm, hạt nhồi cỡ 0.3-5µm,…Chất nhồi cột phụ thuộc vào lọai cột và kiểu sắc ký.1.6. Đầu dòLà bộ phận phát hiện các chất khi chúng ra khỏi cột và cho các tín hiệu ghi trên sắc ký đồ đểcó thể định tính và định lượng. Tùy theo tính chất của các chất phân tích mà người ta lựachọn lọai đầu dò phù hợp.Tín hiệu đầu dò thu được có thể là: độ hấp thụ quang, cường độ phát xạ, cường độ điện thế,độ dẫn điện, độ dẫn nhiệt, chiết suất,…

Trên cơ sở đó, người ta sản xuất các lọai đầu dò sau:

– Đầu dò quang phổ tử ngọai 190-360nm để phát hiện UV– Đầu dò quang phổ tử ngoại khả kiến [UV-VIS] [190-900nm] để phát hiện các chất hấp thụquang. Đây là lọai đầu dò thông dụng nhất.– Đầu dò hùynh quang [RF] để phát hiện các chất hữu cơ chứa huỳnh quang tự nhiên và cácdẫn suất có huỳnh quang.– Đầu dò DAD [Detector Diod Array] có khả năng quét chồng phổ để định tính các chất theođộ hấp thụ cực đại của các chất.– Đầu dò khúc xạ [chiết suất vi sai] thường dùng đó các loại đường.– Đầu dò điện hóa: đo dòng, cực phổ, độ dẫn.– Đầu dò đo độ dẫn nhiệt, hiệu ứng nhiệt,…1.7. Bộ phận ghi nhận tín hiệuBộ phận này ghi tín hệiu do đầu dò phát hiện.Đối với các hệ thống HPLC hiện đại, phần này được phần mềm trong hệ thống ghi nhận, lưu

các thông số, sắc ký đồ, các thông số liên quan đến peak như tính đối xứng, hệ số phân giải,…

đồng thời tính tóan, xử lý các thông số liên quan đến kết quả phân tich.1.8. In dữ liệuSau khi phân tích xong, dữ liệu sẽ được in ra qua máy in kết nối với máy tính có cài phầnmềm điều khiển.2. Một số hệ thống HPLC tại CASENgày nay, phương pháp HPLC được ứng dụng rất rộng rãi trong lĩnh vực phân tích định tínhcũng như định lượng các thành phần trong dược phẩm, thực phẩm, môi trường, hóa chất,…Thiết bị HPLC cũng ngày càng phát triển và hiện đại hơn nhờ sự phát triển nhanh chóng củangành chế tạo và sản xuất thiết bị phân tích.Để đảm bảo chất lượng kết quả phân tích nhiều loại chỉ tiêu trên các nền mẫu khác nhau, đápứng được nhu cầu phân tích đa dạng của khách hàng, CASE cũng đã đầu tư các hệ thốngHPLC hiện đại của các hãng nổi tiếng trên thế giới trong sản xuất thiết bị phân tích nhưShimadzu [model 10A, 20A], Agilent [LC 1200], Dionex [UltiMate 3000], Thermo, Mehtrom…

với hầu hết các đầu dò như quang phổ tử ngoại khả kiến [UV-VIS], huỳnh quang [RF], khúc

xạ [RI], đo độ dẫn [sắc ký ion-IC], khối phổ [MS],… Các hệ thống HPLC này đều có gắn cácbộ chích mẫu tự động nhằm nâng cao tính chính xác và có thể phân tích đồng thời nhiều mẫu.3. Ứng dụng HPLC phân tích mẫu tại CASEPhân tích đa lượng vitamin, kháng sinh, kháng khuẩn, chất bảo quản phụ gia thực phẩm, cácloại đường,… trong thực phẩm, dược liệu, hóa chất, phân bón, thức ăn gia súc,…Phân tích vi lượng các vitamin trong trái cây, sữa, bánh kẹo, nước, thủy hải sản.Phân tích dộc tố sinh học biển trong nghêu [ASP].Phân tích các hoạt chất, tạp chất trong dược phẩm theo các dược điển BP, USP, EP, JP,…Phân tích các acid hữu cơ.Đặc biệt, hệ thống HPLC với đầu dò huỳnh quang có độ nhạy và tính chọn lọc cao có thể phântích các độc tố Mycotoxin trong thực phẩm, nguyên liệu chế biến và thức ăn gia súc như

Aflatoxin, Orchatoxin, Zearalenone,…

Các bước cần chuẩn bị cho việc xây dựng và sử dụng 1 phương pháp HPLC mới!Ngày nay, sắc ký lỏng hiệu năng cao trở thành 1 trong những kỹ thuật không thể thiếu trongphân tích hiện đại. Nhờ xử lý mẫu dễ và có thể sử dụng trong phân tích theo quy mô côngnghiệp nên các nhà máy dược hàng đầu đang ngày càng khai thác triệt để thiết bị này. Tuy dễdàng sử dụng nhưng việc xây dựng phương pháp phân tích cho các mục tiêu phân tích lại làthử thách rất lớn cho các kiểm nghiệm viên HPLC. Đặc biệt trong lĩnh vực dược phẩm, thựcphẩm thì các phương pháp này bắt buộc phải được thẩm định và kiểm soát vô cùng chặt chẽ.Được ví như là khug xương sống cho toàn bộ quá trình phân tích HPLC nên việc xây dựng vàhoàn thiện method HPLC là điều cần thiết. Bạn không chỉ xây dựng nên cách xử lý mẫu, lựachọn pha động, dung môi, lựa chọn cột phân tích, nhiệt độ phân tích, đầu dò phân tích và cảxây dựng các công thức tính định lượng cũng như xem xét các yếu tố đánh giá khách quannhư USP, ISO…Vì vậy bài viết hôm nay sẽ giúp cho các bạn kiểm nghiệm viên HPLC làm quen với các bướctạo lập phương pháp HPLC.Phần I- Thu thập thông tin

Khi tiến hành phân tích bất cứ 1 hoạt chất nào, điều quan trọng nhất là chúng ta phải biết đối

tượng mình cần phân tích như thế nào. Ông bà ta có câu: ” Biết địch biết ta,trăm trận trămthắng! ” vì vậy chúng ta cũng cần biết đối tượng cần phân tích là hoạt chất gì, tính chất hóavà lý học ra sao, các công trình nghiên cứu trên thế giới đã có ai làm chưa và còn nhiều câuhỏi khác nữa.Nhưng trong lĩnh vực dược phẩm và thực phẩm thì chúng ta sẽ cần tìm hiểu các thông tin sauđây:_ Hoạt chất phân tích có tính chất hóa lý thế nào? Câu hỏi này giúp chúng ta hình dung rađược hoạt chất cần phân tích có tính chất vật lý thế nào [ lỏng hay rắn, dễ tan trong dung môinào, có hấp thụ UV-VIS hay không, có chiết suất hay không,…]; có tính chất hóa học ra sao[ hoạt chất sẽ tương tác thế nào đến các phụ gia trong sản phẩm, điều kiện phản ứng cô lậphoạt chất như thế nào,…]._ Điều kiện phân tích của mình như thế nào? Câu hỏi này giúp cho bạn đánh giá và lựa chọnphương pháp phân tích phù hợp với điều kiện của bạn hiện tại nhất. Tránh việc tìm kiếm cácphương pháp xa rời thực tế, gây phân tán nguồn lực của công ty bạn.Đã có công trình nghiên cứu nào trên thế giới về hoạt chất này hay chưa? Câu hỏi này khárộng, chúng ta có thể dựa vào các tài liệu nghiên cứu từ các nguồn thông tin chính thống[ Như USP, EP, BP, ISO hoặc các tiêu chuẩn Việt Nam được nhà nước ban hành]. Tại saochúng ta phải tìm các thông tin này thì câu trả lời là: Các hoạt chất chúng ta phân tíchthường trên thế giới đã được sử dụng và phân tích rất nhiều. Các tổ chức dược phẩm, thựcphẩm đều cung cấp cho ta các method phân tích rõ ràng và đã qua thẩm định lâu dài. Vì vậyviệc sử dụng các tài liệu này là kim chỉ nam giúp cho chúng ta hình dung ra được công việcmình sẽ làm như thế nào, tuần tự ra sao.

Luôn tìm những tài liệu hữu ích từ các nguồn tin cậy!

_ Có cá nhân nào, tổ chức trong nước nào đã phân tích hoạt chất này chưa? Câu hỏi nàygiúp bạn tìm được những người có kinh nghiệm trong việc phân tích hoạt chất bạn đang làm.Họ sẽ cung cấp cho bạn những kinh nghiệm quý báu, những thủ thuật hoặc mẹo vặt hữu ích.Với các câu hỏi trên, ít nhiều gì cũng đã giúp bạn tìm ra được nguồn tài liệu quý báu và định

hướng phát triển phương pháp phù hợp nhất với điều kiện của công ty bạn. Đồng thời với các

thông tin đó, chúng ta đã có thể tự tin bước những bước tiếp theo trong quá trình xây dựngmethod HPLC.SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO – NHỮNG MẸO VẶT HỮU ÍCH [PHẦN 7].StandardPeak nở rộng.Trong quá trình phân tích HPLC, ít nhiều chúng ta đã gặp trường hợp peak của chúng ta bịnở rộng ra hai bên. Điều này nếu không được khắc phục hiệu quả sẽ làm cho chúng ta mất rấtnhiều thời gian và công sức. Vậy thì chúng ta hãy cùng nhau tìm hiểu nguyên nhân gây rahiện tượng này là gì và phòng tránh,khắc phục như thế nào.Peak có thể nở rộng tất cả các peak như hình trên hoặc đôi khi chỉ là 1 vài peak ngẫu nhiênmà thôi. Nguyên nhân chính của hiện tượng này là do: cột của chúng ta đã có tuổi và bị mấthiệu năng, cột bị tắc nghẽn, các mối nối trong hệ thống không tốt, thể tích tiêm mẫu hoặcnồng độ mẫu quá lớn. Ngoài ra khi tiến hành phân tích các mẫu có phân tử khối quá lớn[protein hoặc polymer] cũng gây nên hiện tượng nở rộng peak.Vậy thì chúng ta khắc phục như thế nào. Nhìn chung chúng ta sẽ có 2 vấn đề chính đó là dophần cứng [cột sắc ký, các mối nối,…] và do phương pháp phân tích.Với vấn đề do cột sắc ký thì câu trả lời vẫn như các phần trước đó là tiến hành vệ sinh cột. Đểphòng tránh hiện tượng này xảy ra, chúng ta luôn lựa chọn cột tốt, bảo quản cột cẩn thận[ luôn vệ sinh cột định kỳ, bảo quản đúng cách và dùng các biện pháp bảo vệ cột khỏi nhiểmbẩn].Với vấn đề về phương pháp phân tích thì chúng ta có thể khắc phục như sau. Nếu phươngpháp của chúng ta có thể tích tiêm mẫu quá cao, chúng ta có thể chỉnh lại thông số này đểkhác phục hiện tượng trên, cũng như mang đến kết quả phân tích tối ưu nhất.Còn khi tiến hành phân tích các mẫu có phân tử khối quá lớn như các polymer, protein chúngta cần xây dựng các phương pháp thích hợp với trang bị phần cứng chuyên dụng. Ví dụ sửdụng các loại cột phân tích chuyên dụng với bộ ổn cột và đầu dò chuyên dụng để mang lại kếtquả tốt nhất. Ngoài ra, khi tiến hành phân tích các dạng protein, acid amine chúng ta có thểtiến hành sử dụng các thiết bị chuyên phân tích các chất này. Như của hãng Hitachi chúng tacó hệ thống AAA L-8900.

Chẻ peak do hiệu ứng dung môi.

Xem thêm: Bật mí cách làm bánh mì ngọt nhân dừa thơm ngon, hấp dẫn tại nhà

Hiện tượng chẻ peak còn được gặp trong trường hợp sau đây. Khi tiến hành phân tíchSalicylamide và Caffein trong 1 loại thuốc giảm đau ta thu nhận được phổ đồ như sau.Khi mà thay đổi dung môi trong mẫu bằng chính pha động thì hiện tượng chẻ peak biến mất.Điều này chứng tỏ rằng nếu dung môi xử lý mẫu có độ phân cực thấp hơn pha động sẽ gâylàm cho peak của mẫu bị bè và chẻ peak. Giải thích cho hiện tượng này, chúng ta hãy hìnhdung như sau: Khi chúng ta dùng dung môi có độ phân cực thấp hơn, đầu tiên dung môi hiểnnhiên có liên kết với hợp chất cần phân tích bên cạnh đó cột sẽ hình thành liên kết giữ dungmôi lại [điều tương tự cũng xảy ra với pha động nhưng mà liên kết ở pha động thấp hơn dungmôi – do độ phân cực pha động cao hơn dung môi]. Điều này làm cho peak của mẫu phân tíchbị bè rộng và đôi khi là bị chẻ peak.Để khắc phục tình trạng này chúng ta nên tiến hành chọn dung môi có độ phân cực cao hơnhoặc bằng pha động [hay nhiều bài báo ghi rằng nồng độ chất hữu cơ ít hơn]. Kết quả làchúng ta thu được phổ như hình bên dưới.Chú ý rằng tùy vào loại cột mà chúng ta nên đọc tài liệu liên quan và tiến hành chọn dung môithích hợp.Những vấn đề về hình dạng của peak [mũi tín hiệu] – tiếp theo.Chẻ peak do cột bị nhiễm bẩn:Đôi khi, trong quá trình phân tích bạn phải chạy số lượng mẫu quá nhiều và điều đó làm chocột sắc ký của bạn bị nhiễm bẩn gây nên hiện tượng chẻ peak. Như hiện tượng dưới đây: khitiến hành chạy tạp trong của APAP trong 1 loại thuốc cảm, người ta thu được phổ đồ như sau:Với trường hợp chạy quá nhiều mẫu và bị chẻ peak như vậy, chúng ta nên tiến hành kiểm tracác bước sau đây. Thứ nhất là kiểm tra lại bảo vệ cột của chúng ta có bị bẩn hay không, vệsinh bảo vệ cột. Kế đến nếu hiện tượng vẫn tiếp diễn thì chúng ta nên vệ sinh luôn cột sắc kýcủa mình [như trình bày ở phần trước].Chú ý: để hạn chế trường vấn đề này xảy ra, khi các bạn chạy sắc ký quá nhiều mẫu, bạn nênchỉnh thời gian chạy mỗi mẫu dài ra hơn. Hành động này có mục đích là rữa giải cột nhiềuhơn trong quá trình chạy mẫu và hạn chế việc cột bị nhiễm bẫn. Ngoài ra chúng ta cũng cầnnghiên cứu lại phương pháp xử lý mẫu để giảm thiếu hiện tượng cột bị nhiễm bẩn.

Những vấn đề về hình dạng của peak [mũi tín hiệu]:

Trong sắc ký lỏng cao áp thì tín hiệu thu được chính là kết quả cuối cùng của chúng ta. Thửnghĩ nếu sau khi phân tích xong mọi thứ, chúng ta thu được 1 mớ phổ với những mũi tín hiệuto bè, chẻ đôi hoặc tệ hơn là nhiều mũi chồng lên nhau thì xem như công cốc. Điều đó thật sự

là nỗi ám ảnh của những kiểm nghiệm viên chạy sắc ký. Hiểu điều đó, hôm nay chúng ta sẽ

tiếp tục đến với phần kế tiếp của chuyên mục: “Mẹo vặt hữu ích khi chạy HPLC” với vấn đềvề mũi tín hiệu.Những vấn đề chính về peak [mũi tín hiệu] trong HPLC được chia làm 3 dạng thường gặp:Chúng ta nên nhớ rằng 1 vấn đề về peak có thể bao gồm 1, 2 hoặc cả 3 hiện tượng trên cùnglúc. Ví dụ: Chẻ peak kèm theo kéo đuôi, peak kéo đuôi và nở rộng,…Hiện tượng có thể chỉ xảy ra với vài mẫu trong cả dãy mẫu của mình và mỗi vấn đề có thể donhiều nguyên nhân gây ra.

1.

Chẻ peak bởi sự phá vỡ các rãnh dẫn mẫu trong cột:Các bạn hãy tưởng tượng, khi ta tiến hành bơm mẫu cùng pha động vào cột. Các dòng chấtlỏng sẽ len lỏi giữa các hạt silica gel và tạo nên các rãnh dẫn truyền mẫu. Sự phá vỡ các rãnhdẫn mẫu trong cột – do 1 lý do khách quan hay chủ quan nào đó – làm cho peak của chúng tabị chẻ.

Nguyên nhân chính ở đây là do:





Các rãnh dẫn truyền này bị phá vỡ bởi các bọt khí.Do cột có chất lượng không tốt làm cho dòng chảy của mẫu trong cột không ổn định.

pH của pha động quá cao làm hòa tan silica gel trong cột.

Với vấn đề này, đôi lúc peak sẽ bị chẻ ngẫu nhiên, cũng có lúc các peak bị chẻ thành peak đôihết. Vấn đề này cũng thường bị lẫn lộn với việc chẻ peak do đầu lọc pha động bị nghẹt 1 phần.Khi đầu lọc pha động bị nghẹt 1 phần cũng sẽ gây ra hiện tượng như trên.Vấn đề này rất khó để giải quyết triệt để. Vì nó có nguyên nhân trực tiếp từ chất lượng củacột HPLC, hệ thống đang chạy có bộ degasser hoạt động kém hoặc do tay nghề của kiểmnghiệm viên [khi pha pha động, làm mẫu có bọt khí…].Về yếu tố con người: Chúng ta nên kiểm tra lại xem thao tác kiểm nghiệm viên đã đúng chưa,đạt yêu cầu chưa, v.v…Về yếu tố thiết bị: Để phòng tránh vấn đề này xảy ra chúng ta nên chọn các loại cột từ cáchãng uy tín như: Lachrom của Hitachi, Restek, Tosho,… đồng thời nên có sự lựa chọn đúngđắn loại cột cho từng phép phân tích ví dụ như: khi chạy các dạng pha động có pH cao quáchúng ta nên dùng các loại cột chuyên dụng hoặc nghiên cứu lại pha động để mang lại kết quảtốt nhất.Đối với vấn đề hệ thống, chúng ta cần liên lạc với sevice để có sự hổ trợ hợp lý, kịp thời. Hoặc

nặng hơn là lựa chọn lại dòng sản phẩm HPLC tốt hơn thay thế. Lời khuyên là chúng ta nên

sử dụng các hệ thống HPLC có tiếng tăm như bên 2H cung cấp hệ HitachiChromaster,Hitachi Primaide hoặc của các hãng có tiếng khác.Áp suất [tiếp theo].Khi bạn nghi ngờ áp suất hệ thống của mình tăng cao do cột sắc ký, rất có thể cột sắc ký củabạn đã bị nhiễm bẩn và cần phải được vệ sinh hợp lý. Sau đây là các bước tiến hành vệ sinhcột sắc ký của bạn.Đầu tiên bạn tiến hành đảo đầu cột và rửa cột bằng chính pha động bạn đang chạy mẫu. Việclàm này giúp bạn có thể rửa những vết bẩn đã bám lên trên màng lọc ở đầu vào của cột. Đôikhi những vẫn đục lơ lửng trong mẫu cũng có thể làm bẩn và nghẹt màng lọc ở đầu cột củabạn và đó là lý do gây ra hiện tượng tăng áp trên hệ thống của bạn.Nếu sau khi đảo đầu cột mà áp suất vẫn cao. Điều này chứng tỏ cột của bạn đã bị nhiễm bẩn[do tủa của mẫu hoặc pha động bên trong cột, do các hợp chất hấp thụ quá sâu vào trong cột,

…]. Chúng ta tiến hành rửa cột với các pha động theo thứ tự tăng dần độ phân cực. Bảng bên

dưới liệt kê danh sách các dung môi hữu cơ theo thứ tự tăng dần độ phân cực.Lưu ý:



Dùng ít nhất là 25mL của mỗi dung môi để rửa cột.Quá trình rửa cột sẽ tốn thời gian khá lâu và bạn nên thực hiện nó trong chế độ offline.Cũng như bạn nên dự trù trước thời gian để sắp xếp công việc của bạn.Nếu các bạn tiến hành rửa cột bằng các dung môi có độ phân cực thấp như Hexane hayMethylene Chloride thì chúng ta bắt buộc phải tiếp tục rửa cột qua Isopronanol rồi mới được sửdụng với pha động có độ phân cực cao hơn.Một số người cho rằng chúng ta nên thay thế màng lọc bên trong của cột để cải thiện tình hìnhtạp bẩn của cột. Nhưng xin thưa, việc làm đó vô cùng khó khăn cũng như cần phải có đầy đủthiết bị, dụng cụ để chúng ta mở và thay màng lọc của cột.Với cấu tạo như vậy thì việc thay thế màng lọc của cột sắc ký lỏng là rất khó. Vì vậy thay vìchúng ta làm việc khó khăn, chúng ta hãy làm những biện pháp phòng ngừa để ngăn chặn

việc nghẹt cột xảy ra thì sẽ dễ hơn nhiều.

Mẹo:Kỹ thuật phòng chống hiện tượng nghẹt cột – rẻ mà hữu hiệu:1.Sử dụng bảo vệ cột: bao gồm hệ thống lọc dây pha động, bộ bảo vệ cột.2.Lọc mẫu cho mỗi lần phân tích.3.Lọc pha động cho mỗi lần phân tích.Đây là những biện pháp dễ dàng, rẻ nhưng vô cùng tiện lợi giúp hạn chế tối đa hiện tượngnghẹt cột trong hệ thống HPLC.

Áp suất.

Trong sắc ký lỏng hiệu năng cao thì áp suất có ảnh hưởng rất nhiều đến giá trị phân tích. Bêncạnh đó nếu xét về mặt kỹ thuật thiết bị thì áp suất ảnh hưởng lớn đến tuổi thọ của thiết bị. Vìvậy khi gặp các rắc rối về áp suất thì chúng ta cần phải giải quyết nó 1 cách toàn diện.Khi nói đến vấn đề áp suất thì chúng ta sẽ gặp các hiện tượng sau:

1.

Áp suất quá cao so với bình thường: đây là vấn đề thường gặp nhất ở các phòng kiểmnghiệm. Với hiện tượng này sẽ làm cho tuổi thọ của thiết bị chúng ta bị giảm [ các đường ống,van đóng mở, flow-cell,…], cột bị giảm tuổi thọ,… Ngày nay các hệ thống HPLC đều có hệthống an toàn của riêng nó vì vậy khi gặp việc áp quá cao thiết bị sẽ tự ngắt đảm bảo an toànthiết bị. Nhưng như vậy sẽ làm giảm hiệu suất làm việc của phong kiểm nghiệm. Thử nghĩ,chúng ta lên mẫu xong, định sẽ chạy qua đêm nhưng vì áp suất tăng đột ngột làm hệ thống bịngừng. Thế là sáng hôm sau mình phải chạy lại từ đầu.2.Áp suất thấp hơn so với bình thường: đây cũng là 1 vấn đề thường gặp ở các phòngkiểm nghiệm [dù ít khi gặp hơn]. Vấn đề này có 2 nguyên nhân chính: thứ nhất là do lỗi củakiểm nghiệm viên – thiết lập bơm không đúng như quy trình; thứ hai là do hệ thống bị rò rỉ ởđâu đó. Ở nguyên nhân do kiểm nghiệm viên, chúng ta hãy kiểm tra lại quy trình và thiết lậpcủa máy. Ở nguyên nhân thứ hai, mọi thứ sẽ khó hơn. Chúng ta phải kiểm tra trên phần mềmcủa máy xem có báo rò rỉ ở đâu module nào không – ở các dòng máy của Hitachi đều có trangbị tính năng này. Sau đó kiểm tra đường ống ở từng module, bắt đầu từ bơm, lên đếnautosampler, column oven. Đôi lúc chúng ta phải nhờ đến hỗ trợ kỹ thuật bên nhà cung cấp –với dòng Chromaster và sản phẩm cung cấp bởi công ty 2H thì các bạn sẽ được hỗ trợ trongvòng 24 giờ từ lúc có sự cố – để tìm hiểu chổ rò rỉ ở đâu.Nhận biết nguyên nhân gây ra áp suất cao và phương hướng giải quyết:Kiểm tra áp suất của hệ thống khi có cột và khi không có cột trong hệ thống. Chúng ta thử gỡcột ra và thay thế bằng ống mao quản và theo dõi áp suất của hệ thống. Điều này giúp ta pháthiển ra hệ thống đang bị nghẹt do hệ thống bên trong hay là do cột.



Nếu sau khi gỡ cột ra mà áp suất hệ thống vẫn cao. Có thể là hệ thống đường ống đã bị



nghẹt. Chúng ta cần liên lạc với bảo trì của hãng để có thể đưa ra cách vệ sinh tốt nhất chomáy. Lưu ý rằng khi bên bảo trì của hãng xuống sữa chửa, chúng ta cần nhờ họ hướng dẫnchúng ta biết cách để sau này có thể giải quyết vấn đề tương tự.Nếu gỡ cột ra mà áp suất hệ thống giảm xuống. Điều này chứng tỏ cột của chúng tađang gặp vấn đề.Bản thân tôi là 1 kiểm nghiệm viên, tôi hiểu cảm giác của bạn khi gặp phải những vấn đề vềhệ thống sắc ký của mình. Từ những vấn đề đơn giản như áp suất không đạt, máy báo lỗi chođến kết quả phân tích không đạt… Dựa vào những tài liệu sẵn có cùng với kinh nghiệm củamình, sau chuỗi bài về Chromaster tôi giới thiệu tiếp bài về những mẹo vặt thường dùng trongphân tích sắc ký lỏng hiệu năng cao.

Việc đầu tiên bạn phải nhớ đó là đừng hốt hoảng!

Những cái máy HPLC thế hệ mới đều có hệ thống tự bảo vệ của riêng nó nên đừng hoảng hốtkhi máy báo lỗi. Thay vì hốt hoảng, bạn hãy trả lời những câu hỏi theo trình tự sau đây:

1.

Hệ thống của mình đang vận hành có phù hợp với mẫu sử dụng? Mẫu của mình cóđảm bảo hay không?2.Kiểm tra lại quy trình thực hiện của mình:1.Quy trình có thực hiện đúng chưa?2.

Thiết bị của mình đã được thiết lặp phù hợp chưa?

Xem thêm: Bật mí cách làm bánh mì ngọt nhân dừa thơm ngon, hấp dẫn tại nhà

3.Kiểm tra thêm các thông tin:1.Lần cuối hệ thống hoạt động có đúng hay không?2.Có điều gì thay đổi trong đó hay không?4.Xem lại hết các yếu tố tổng quát:1.Đôi lúc chúng ta không phải luôn có nguyên nhân rõ ràng.2.Có phải đã có 1 điều gì [dù nhỏ nhất] đã thay đổi trong hệ thống phải không?Đôi lúc chỉ những câu hỏi đó thôi đã giúp chúng ta tìm ra được câu trả lời cho sự cố củamình!Các đặc điểm chung: với các dòng đầu dò 5410/5420/5430, Hitachi đưa ra lựa chọn sử dụngloại flow-cell ổn định nhiệt độ. Như chúng ta cũng biết ảnh hưởng của nhiệt độ lên kết quảphân tích là rất lớn. Vì vậy việc ổn nhiệt cho cả hệ thống là cần thiết. Chính vì thế Hitachi đưalựa chọn flow-cell ổn nhiệt cho Chromaster. Với sự ổn định nhiệt của flow-cell, giúp giảmthiểu sự ảnh hưởng của nhiệt độ môi trường. Kết quả mang lại đó chính là sự ổn định củađường nền và từ đó cải thiện độ tin cậy của phép đo.Đầu dò của các dòng này mặc định được đính kèm với các đèn Hg nhằm kiểm tra bước sóngvùng UV cho các detector trong HPLC. Các đèn Hg này phát ra bước sóng vô cùng ổn địnhgiúp cho kết quả thu được từ hệ thống là rất tin cậy. Ngoài ra với khả năng chịu đựng vật lýcao nên các đèn Hg này có tuổi thọ bền lâu và thời gian sử dụng lâu dài.Với mỗi đầu dò khác nhau, Hitachi đều mang lại những lựa chọn tiện ích cho hệ thống củamình. Điều đó giúp cho việc định hướng ứng dụng của thiết bị là dễ dàng hơn rất nhiều. Đồngthời giúp doanh nghiệp giảm chi phí cho những ứng dụng không cần đến.Là trưởng phòng của 1 phòng quản lý chất lượng, đã bao giờ bạn gặp khó khăn khi muốn biếtcây cột sắc ký của mình đã được sử dụng như thế nào? Để trả lời cho yêu cầu đó bắt buộc bạn

phải có 1 hệ thống sổ sách để quản lý cột sắc ký của mình. Sẽ mất nhiều thời gian của bạn và

của nhân viên bạn để kiểm soát những chiếc cột sắc ký đó. Hiểu vấn đề đó, Chromaster cungcấp lựa chọn hệ thống quản lý cột thông qua thẻ tag kèm theo bộ ổn cột cơ bản. với hệ thốngthẻ tag này, chúng ta có thể dễ dàng truy xuất thông tin của cột [gồm cột của hãng nào, loại gì,sử dụng bao lâu, thường dùng với method nào,…].Ngoài ra bạn còn có thể dễ dàng kết nối thẻ tag trên cột với cổng kết nối USB trên máy tính đểcó thể kiểm soát tình trạng sử dụng cột. Điều này rất hữu ích đối với 1 số phòng kiểm nghiệm,QC của các công ty dược. Theo GMP và GLP họ cần quản lý thiết bị qua Logbook viết tay thìgiờ có thể dễ dàng quản lý cột bằng cách này thay vì lật từng trang Logbook ra xem lịch sử

dùng cột.

Trong một số phản ứng phân tích người ta có yêu cầu phải chạy cột tiền xử lý trước rồi sau đómới tiến hành chạy sắc ký phân tích. Để đáp ứng điều này, Hitachi mang lại lựa chọn hệ thốngcột tiền phản ứng trong hệ ổn cột của Chromaster. Với bộ phận này, chúng ta sẽ có 1 valvegồm 6 cổng, 2 vị trí và có thể lựa chọn bất kỳ 1 cột tiền xử lý nào.Trong một số quy trình phân tích [ theo USP, EP, BP, ISO,…] thì yếu tố nhiệt độ của cột phântích cũng được đề cập rất nhiều. Đặc biệt trong sắc ký lỏng ion thì yếu tố nhiệt độ được đặtlên hàng đầu vì nó ảnh hưởng trực tiếp đến kết quả phân tích. Chính vì thế việc cần có 1 bộổn nhiệt cho cột sắc ký là cần thiết. Ngày nay thì hầu hết các nhà cung cấp sắc ký đều có bộ ổncột với các công nghệ tối ưu cho riêng mình. Nhưng làm thế nào để lựa chọn thì cần có nhữngsuy xét kỹ hơn về những tiện ích mà nhà sản xuất mang lại. Tiếp theo về chuỗi bài giới thiệudòng sản phẩm HPLC Chromaster của Hitachi, chúng ta sẽ được tìm hiểu về những tiện íchmà Hitachi mang lại cho doanh nghiệp của mình.Như bài đợt trước chúng ta đã đề cập đến việc khắc phục hiện tượng cary-over, hôm naychúng ta sẽ tiếp tục tìm hiểu sâu thêm về những ưu điểm của dòng thiết bị này.Bên cạnh việc triệt tiêu tối đa hiện tượng carry-over trên autosampler, Hitachi còn cải thiệnlại hệ thống giao tiếp giữa autosampler và bộ phận kết nối trung tâm [máy tính] nhằm manglại tốc độ tiêm mẫu và lấy mẫu nhanh nhất có thể. Nếu như trước đây với các dòng máy cũnhư L-2000 hay L-7000 thì việc ngồi chờ hơn 3 phút để máy tiêm mẫu gặp hoài như cơm bữa

thì nay với Chromaster mọi thứ trở nên cực kỳ nhanh chóng. Chỉ khoảng 30 giây là thiết bị đã

hoàn thành quá trình tiêm mẫu – một con số cực kỳ ấn tượng đối với các dòng máy săc ký
lỏng hiệu năng cao ngày nay.

Tỷ lệ pha động của các đường dung môi không đúng làm cho thời hạn lưu của peakthay đổi. Trong trường hợp bọt quá nhiều, bộ khử khí không hề lọai trừ hết được thì bơm caoáp hoàn toàn có thể không hút được dung môi, khi đó tác động ảnh hưởng đến áp suất và hoạt động giải trí của cảhệ thống HPLC.Trong các trường hợp trên đều dẫn đến sai kết quả nghiên cứu và phân tích. 1.3. Bơm cao ápMục đích để bơm pha động vào cột thực thi quy trình chia tách sắc ký. Bơm phải tạt đượcáp suất cao khỏang 250 – 600 bar và tạo dòng liên tục. Lưu lượng bơm từ 0.1 đến 10 ml / phút. 1.4. Bộ phận tiêm mẫuĐể đưa mẫu vào cột nghiên cứu và phân tích theo với thể tích bơm hoàn toàn có thể thay đồi. Có 2 cách đưa mẫu vào cột : bằng tiêm mẫu bằng tay thủ công và tiêm mẫu tự động [ autosamper ]. 1.5. Cột sắc kýCột chứa pha tĩnh được coi là trái tim của của mạng lưới hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao. Cột pha tĩnh thường thì làm bằng thép không rỉ, chiều dài cột biến hóa từ 5-25 cm đườngkính trong 1-10 mm, hạt nhồi cỡ 0.3 – 5 µm, … Chất nhồi cột phụ thuộc vào vào lọai cột và kiểu sắc ký. 1.6. Đầu dòLà bộ phận phát hiện các chất khi chúng ra khỏi cột và cho các tín hiệu ghi trên sắc ký đồ đểcó thể định tính và định lượng. Tùy theo đặc thù của các chất nghiên cứu và phân tích mà người ta lựachọn lọai đầu dò phù hợpTín hiệu đầu dò thu được hoàn toàn có thể là : độ hấp thụ quang, cường độ phát xạ, cường độ điện thế, độ dẫn điện, độ dẫn nhiệt, chiết suất, … Trên cơ sở đó, người ta sản xuất các lọai đầu dò sau : – Đầu dò quang phổ tử ngọai 190 – 360 nm để phát hiện UV – Đầu dò quang phổ tử ngoại khả kiến [ UV-VIS ] [ 190 – 900 nm ] để phát hiện các chất hấp thụquang. Đây là lọai đầu dò thông dụng nhất. – Đầu dò hùynh quang [ RF ] để phát hiện các chất hữu cơ chứa huỳnh quang tự nhiên và cácdẫn suất có huỳnh quang. – Đầu dò DAD [ Detector Diod Array ] có năng lực quét chồng phổ để định tính các chất theođộ hấp thụ cực lớn của các chất. – Đầu dò khúc xạ [ chiết suất vi sai ] thường dùng đó các loại đường. – Đầu dò điện hóa : đo dòng, cực phổ, độ dẫn. – Đầu dò đo độ dẫn nhiệt, hiệu ứng nhiệt, … 1.7. Bộ phận ghi nhận tín hiệuBộ phận này ghi tín hệiu do đầu dò phát hiện. Đối với các mạng lưới hệ thống HPLC văn minh, phần này được ứng dụng trong mạng lưới hệ thống ghi nhận, lưucác thông số kỹ thuật, sắc ký đồ, các thông số kỹ thuật tương quan đến peak như tính đối xứng, thông số phân giải, … đồng thời tính tóan, giải quyết và xử lý các thông số kỹ thuật tương quan đến kết quả phân tich. 1.8. In dữ liệuSau khi nghiên cứu và phân tích xong, tài liệu sẽ được in ra qua máy in liên kết với máy tính có cài phầnmềm điều khiển và tinh chỉnh. 2. Một số mạng lưới hệ thống HPLC tại CASENgày nay, chiêu thức HPLC được ứng dụng rất thoáng rộng trong nghành nghiên cứu và phân tích định tínhcũng như định lượng các thành phần trong dược phẩm, thực phẩm, thiên nhiên và môi trường, hóa chất, … Thiết bị HPLC cũng ngày càng tăng trưởng và tân tiến hơn nhờ sự tăng trưởng nhanh gọn củangành sản xuất và sản xuất thiết bị nghiên cứu và phân tích. Để bảo vệ chất lượng kết quả nghiên cứu và phân tích nhiều loại chỉ tiêu trên các nền mẫu khác nhau, đápứng được nhu yếu nghiên cứu và phân tích phong phú của người mua, CASE cũng đã góp vốn đầu tư các hệ thốngHPLC văn minh của các hãng nổi tiếng trên quốc tế trong sản xuất thiết bị nghiên cứu và phân tích nhưShimadzu [ Mã Sản Phẩm 10A, 20A ], Agilent [ LC 1200 ], Dionex [ UltiMate 3000 ], Thermo, Mehtrom … với hầu hết các đầu dò như quang phổ tử ngoại khả kiến [ UV-VIS ], huỳnh quang [ RF ], khúcxạ [ RI ], đo độ dẫn [ sắc ký ion-IC ], khối phổ [ MS ], … Các mạng lưới hệ thống HPLC này đều có gắn cácbộ chích mẫu tự động hóa nhằm mục đích nâng cao tính đúng chuẩn và hoàn toàn có thể nghiên cứu và phân tích đồng thời nhiều mẫu. 3. Ứng dụng HPLC nghiên cứu và phân tích mẫu tại CASEPhân tích đa lượng vitamin, kháng sinh, kháng khuẩn, chất dữ gìn và bảo vệ phụ gia thực phẩm, cácloại đường, … trong thực phẩm, dược liệu, hóa chất, phân bón, thức ăn gia súc, … Phân tích vi lượng các vitamin trong trái cây, sữa, bánh kẹo, nước, thủy hải sản. Phân tích dộc tố sinh học biển trong nghêu [ ASP ]. Phân tích các hoạt chất, tạp chất trong dược phẩm theo các dược điển BP, USP, EP, JP, … Phân tích các acid hữu cơ. Đặc biệt, mạng lưới hệ thống HPLC với đầu dò huỳnh quang có độ nhạy và tính tinh lọc cao hoàn toàn có thể phântích các độc tố Mycotoxin trong thực phẩm, nguyên vật liệu chế biến và thức ăn gia súc nhưAflatoxin, Orchatoxin, Zearalenone, … Các bước cần sẵn sàng chuẩn bị cho việc kiến thiết xây dựng và sử dụng 1 giải pháp HPLC mới ! Ngày nay, sắc ký lỏng hiệu năng cao trở thành 1 trong những kỹ thuật không hề thiếu trongphân tích tân tiến. Nhờ giải quyết và xử lý mẫu dễ và hoàn toàn có thể sử dụng trong nghiên cứu và phân tích theo quy mô côngnghiệp nên các nhà máy sản xuất dược số 1 đang ngày càng khai thác triệt để thiết bị này. Tuy dễdàng sử dụng nhưng việc thiết kế xây dựng giải pháp nghiên cứu và phân tích cho các tiềm năng nghiên cứu và phân tích lại làthử thách rất lớn cho các kiểm nghiệm viên HPLC. Đặc biệt trong nghành dược phẩm, thựcphẩm thì các giải pháp này bắt buộc phải được đánh giá và thẩm định và trấn áp vô cùng ngặt nghèo. Được ví như là khug xương sống cho hàng loạt quy trình nghiên cứu và phân tích HPLC nên việc thiết kế xây dựng vàhoàn thiện method HPLC là điều thiết yếu. Bạn không riêng gì thiết kế xây dựng nên cách giải quyết và xử lý mẫu, lựachọn pha động, dung môi, lựa chọn cột nghiên cứu và phân tích, nhiệt độ nghiên cứu và phân tích, đầu dò nghiên cứu và phân tích và cảxây dựng các công thức tính định lượng cũng như xem xét các yếu tố nhìn nhận khách quannhư USP, ISO … Vì vậy bài viết thời điểm ngày hôm nay sẽ giúp cho các bạn kiểm nghiệm viên HPLC làm quen với các bướctạo lập giải pháp HPLC.Phần I – Thu thập thông tinKhi thực thi nghiên cứu và phân tích bất kể 1 hoạt chất nào, điều quan trọng nhất là tất cả chúng ta phải biết đốitượng mình cần nghiên cứu và phân tích như thế nào. Ông bà ta có câu : ” Biết địch biết ta, trăm trận trămthắng ! ” thế cho nên tất cả chúng ta cũng cần biết đối tượng người tiêu dùng cần nghiên cứu và phân tích là hoạt chất gì, đặc thù hóavà lý học ra làm sao, các khu công trình điều tra và nghiên cứu trên quốc tế đã có ai làm chưa và còn nhiều câuhỏi khác nữa. Nhưng trong nghành dược phẩm và thực phẩm thì tất cả chúng ta sẽ cần tìm hiểu và khám phá các thông tin sauđây : _ Hoạt chất nghiên cứu và phân tích có đặc thù hóa lý thế nào ? Câu hỏi này giúp tất cả chúng ta tưởng tượng rađược hoạt chất cần nghiên cứu và phân tích có đặc thù vật lý thế nào [ lỏng hay rắn, dễ tan trong dung môinào, có hấp thụ UV-VIS hay không, có chiết suất hay không, … ] ; có đặc thù hóa học ra làm sao [ hoạt chất sẽ tương tác thế nào đến các phụ gia trong loại sản phẩm, điều kiện kèm theo phản ứng cô lậphoạt chất như thế nào, … ]. _ Điều kiện nghiên cứu và phân tích của mình như thế nào ? Câu hỏi này giúp cho bạn nhìn nhận và lựa chọnphương pháp nghiên cứu và phân tích tương thích với điều kiện kèm theo của bạn hiện tại nhất. Tránh việc tìm kiếm cácphương pháp xa rời trong thực tiễn, gây phân tán nguồn lực của công ty bạn. Đã có khu công trình nghiên cứu và điều tra nào trên quốc tế về hoạt chất này hay chưa ? Câu hỏi này khárộng, tất cả chúng ta hoàn toàn có thể dựa vào các tài liệu điều tra và nghiên cứu từ các nguồn thông tin chính thống [ Như USP, EP, BP, ISO hoặc các tiêu chuẩn Nước Ta được nhà nước phát hành ]. Tại saochúng ta phải tìm các thông tin này thì câu vấn đáp là : Các hoạt chất tất cả chúng ta phân tíchthường trên quốc tế đã được sử dụng và nghiên cứu và phân tích rất nhiều. Các tổ chức triển khai dược phẩm, thựcphẩm đều cung ứng cho ta các method nghiên cứu và phân tích rõ ràng và đã qua thẩm định và đánh giá vĩnh viễn. Vì vậyviệc sử dụng các tài liệu này là kim chỉ nam giúp cho tất cả chúng ta tưởng tượng ra được công việcmình sẽ làm như thế nào, tuần tự ra làm sao. Luôn tìm những tài liệu hữu dụng từ các nguồn đáng tin cậy ! _ Có cá thể nào, tổ chức triển khai trong nước nào đã nghiên cứu và phân tích hoạt chất này chưa ? Câu hỏi nàygiúp bạn tìm được những người có kinh nghiệm tay nghề trong việc nghiên cứu và phân tích hoạt chất bạn đang làm. Họ sẽ cung ứng cho bạn những kinh nghiệm tay nghề quý báu, những thủ pháp hoặc mẹo vặt có ích. Với các câu hỏi trên, không ít gì cũng đã giúp bạn tìm ra được nguồn tài liệu quý báu và địnhhướng tăng trưởng chiêu thức tương thích nhất với điều kiện kèm theo của công ty bạn. Đồng thời với cácthông tin đó, tất cả chúng ta đã hoàn toàn có thể tự tin bước những bước tiếp theo trong quy trình xây dựngmethod HPLC.SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO – NHỮNG MẸO VẶT HỮU ÍCH [ PHẦN 7 ]. StandardPeak nở rộng. Trong quy trình nghiên cứu và phân tích HPLC, không ít tất cả chúng ta đã gặp trường hợp peak của tất cả chúng ta bịnở rộng ra hai bên. Điều này nếu không được khắc phục hiệu suất cao sẽ làm cho tất cả chúng ta mất rấtnhiều thời hạn và sức lực lao động. Vậy thì tất cả chúng ta hãy cùng nhau khám phá nguyên do gây rahiện tượng này là gì và phòng tránh, khắc phục như thế nào. Peak hoàn toàn có thể nở rộng toàn bộ các peak như hình trên hoặc nhiều lúc chỉ là 1 vài peak ngẫu nhiênmà thôi. Nguyên nhân chính của hiện tượng kỳ lạ này là do : cột của tất cả chúng ta đã có tuổi và bị mấthiệu năng, cột bị ùn tắc, các mối nối trong mạng lưới hệ thống không tốt, thể tích tiêm mẫu hoặcnồng độ mẫu quá lớn. Ngoài ra khi thực thi nghiên cứu và phân tích các mẫu có phân tử khối quá lớn [ protein hoặc polymer ] cũng gây nên hiện tượng kỳ lạ nở rộng peak. Vậy thì tất cả chúng ta khắc phục như thế nào. Nhìn chung tất cả chúng ta sẽ có 2 yếu tố chính đó là dophần cứng [ cột sắc ký, các mối nối, … ] và do giải pháp nghiên cứu và phân tích. Với yếu tố do cột sắc ký thì câu vấn đáp vẫn như các phần trước đó là triển khai vệ sinh cột. Đểphòng tránh hiện tượng kỳ lạ này xảy ra, tất cả chúng ta luôn lựa chọn cột tốt, dữ gìn và bảo vệ cột cẩn trọng [ luôn vệ sinh cột định kỳ, dữ gìn và bảo vệ đúng cách và dùng các giải pháp bảo vệ cột khỏi nhiểmbẩn ]. Với yếu tố về giải pháp nghiên cứu và phân tích thì tất cả chúng ta hoàn toàn có thể khắc phục như sau. Nếu phươngpháp của tất cả chúng ta có thể tích tiêm mẫu quá cao, tất cả chúng ta hoàn toàn có thể chỉnh lại thông số kỹ thuật này đểkhác phục hiện tượng trên, cũng như mang đến kết quả nghiên cứu và phân tích tối ưu nhất. Còn khi thực thi nghiên cứu và phân tích các mẫu có phân tử khối quá lớn như các polymer, protein chúngta cần kiến thiết xây dựng các giải pháp thích hợp với trang bị phần cứng chuyên sử dụng. Ví dụ sửdụng các loại cột nghiên cứu và phân tích chuyên sử dụng với bộ ổn cột và đầu dò chuyên sử dụng để mang lại kếtquả tốt nhất. Ngoài ra, khi triển khai nghiên cứu và phân tích các dạng protein, acid amine tất cả chúng ta có thểtiến hành sử dụng các thiết bị chuyên nghiên cứu và phân tích các chất này. Như của hãng Hitachi chúng tacó mạng lưới hệ thống AAA L-8900. Chẻ peak do hiệu ứng dung môi. Hiện tượng chẻ peak còn được gặp trong trường hợp sau đây. Khi triển khai phân tíchSalicylamide và Caffein trong 1 loại thuốc giảm đau ta thu nhận được phổ đồ như sau. Khi mà đổi khác dung môi trong mẫu bằng chính pha động thì hiện tượng kỳ lạ chẻ peak biến mất. Điều này chứng tỏ rằng nếu dung môi giải quyết và xử lý mẫu có độ phân cực thấp hơn pha động sẽ gâylàm cho peak của mẫu bị bè và chẻ peak. Giải thích cho hiện tượng kỳ lạ này, tất cả chúng ta hãy hìnhdung như sau : Khi tất cả chúng ta dùng dung môi có độ phân cực thấp hơn, tiên phong dung môi hiểnnhiên có link với hợp chất cần nghiên cứu và phân tích cạnh bên đó cột sẽ hình thành link giữ dungmôi lại [ điều tương tự như cũng xảy ra với pha động nhưng mà link ở pha động thấp hơn dungmôi – do độ phân cực pha động cao hơn dung môi ]. Điều này làm cho peak của mẫu phân tíchbị bè rộng và đôi lúc là bị chẻ peak. Để khắc phục thực trạng này tất cả chúng ta nên thực thi chọn dung môi có độ phân cực cao hơnhoặc bằng pha động [ hay nhiều bài báo ghi rằng nồng độ chất hữu cơ ít hơn ]. Kết quả làchúng ta thu được phổ như hình bên dưới. Chú ý rằng tùy vào loại cột mà tất cả chúng ta nên đọc tài liệu tương quan và thực thi chọn dung môithích hợp. Những yếu tố về hình dạng của peak [ mũi tín hiệu ] – tiếp theo. Chẻ peak do cột bị nhiễm bẩn : Đôi khi, trong quy trình nghiên cứu và phân tích bạn phải chạy số lượng mẫu quá nhiều và điều đó làm chocột sắc ký của bạn bị nhiễm bẩn gây nên hiện tượng kỳ lạ chẻ peak. Như hiện tượng kỳ lạ dưới đây : khitiến hành chạy tạp trong của APAP trong 1 loại thuốc cảm, người ta thu được phổ đồ như sau : Với trường hợp chạy quá nhiều mẫu và bị chẻ peak như vậy, tất cả chúng ta nên triển khai kiểm tracác bước sau đây. Thứ nhất là kiểm tra lại bảo vệ cột của tất cả chúng ta có bị bẩn hay không, vệsinh bảo vệ cột. Kế đến nếu hiện tượng kỳ lạ vẫn tiếp nối thì tất cả chúng ta nên vệ sinh luôn cột sắc kýcủa mình [ như trình diễn ở phần trước ]. Chú ý : để hạn chế trường yếu tố này xảy ra, khi các bạn chạy sắc ký quá nhiều mẫu, bạn nênchỉnh thời hạn chạy mỗi mẫu dài ra hơn. Hành động này có mục tiêu là rữa giải cột nhiềuhơn trong quy trình chạy mẫu và hạn chế việc cột bị nhiễm bẫn. Ngoài ra tất cả chúng ta cũng cầnnghiên cứu lại chiêu thức giải quyết và xử lý mẫu để giảm thiếu hiện tượng kỳ lạ cột bị nhiễm bẩn. Những yếu tố về hình dạng của peak [ mũi tín hiệu ] : Trong sắc ký lỏng cao áp thì tín hiệu thu được chính là kết quả sau cuối của tất cả chúng ta. Thửnghĩ nếu sau khi nghiên cứu và phân tích xong mọi thứ, tất cả chúng ta thu được 1 mớ phổ với những mũi tín hiệuto bè, chẻ đôi hoặc tệ hơn là nhiều mũi chồng lên nhau thì xem như công cốc. Điều đó thật sựlà nỗi ám ảnh của những kiểm nghiệm viên chạy sắc ký. Hiểu điều đó, ngày hôm nay tất cả chúng ta sẽtiếp tục đến với phần tiếp nối của phân mục : “ Mẹo vặt hữu dụng khi chạy HPLC ” với vấn đềvề mũi tín hiệu. Những yếu tố chính về peak [ mũi tín hiệu ] trong HPLC được chia làm 3 dạng thường gặp : Chúng ta nên nhớ rằng 1 yếu tố về peak hoàn toàn có thể gồm có 1, 2 hoặc cả 3 hiện tượng kỳ lạ trên cùnglúc. Ví dụ : Chẻ peak kèm theo kéo đuôi, peak kéo đuôi và nở rộng, … Hiện tượng hoàn toàn có thể chỉ xảy ra với vài mẫu trong cả dãy mẫu của mình và mỗi yếu tố hoàn toàn có thể donhiều nguyên do gây ra. 1. Chẻ peak bởi sự phá vỡ các rãnh dẫn mẫu trong cột : Các bạn hãy tưởng tượng, khi ta triển khai bơm mẫu cùng pha động vào cột. Các dòng chấtlỏng sẽ len lỏi giữa các hạt silica gel và tạo nên các rãnh dẫn truyền mẫu. Sự phá vỡ các rãnhdẫn mẫu trong cột – do 1 nguyên do khách quan hay chủ quan nào đó – làm cho peak của chúng tabị chẻ. Nguyên nhân chính ở đây là do : Các rãnh dẫn truyền này bị phá vỡ bởi các bọt khí. Do cột có chất lượng không tốt làm cho dòng chảy của mẫu trong cột không không thay đổi. pH của pha động quá cao làm hòa tan silica gel trong cột. Với yếu tố này, đôi lúc peak sẽ bị chẻ ngẫu nhiên, cũng có lúc các peak bị chẻ thành peak đôihết. Vấn đề này cũng thường bị lẫn lộn với việc chẻ peak do đầu lọc pha động bị nghẹt 1 phần. Khi đầu lọc pha động bị nghẹt 1 phần cũng sẽ gây ra hiện tượng kỳ lạ như trên. Vấn đề này rất khó để xử lý triệt để. Vì nó có nguyên do trực tiếp từ chất lượng củacột HPLC, mạng lưới hệ thống đang chạy có bộ degasser hoạt động giải trí kém hoặc do kinh nghiệm tay nghề của kiểmnghiệm viên [ khi pha pha động, làm mẫu có bọt khí … ]. Về yếu tố con người : Chúng ta nên kiểm tra lại xem thao tác kiểm nghiệm viên đã đúng chưa, đạt nhu yếu chưa, v.v … Về yếu tố thiết bị : Để phòng tránh yếu tố này xảy ra tất cả chúng ta nên chọn các loại cột từ cáchãng uy tín như : Lachrom của Hitachi, Restek, Tosho, … đồng thời nên có sự lựa chọn đúngđắn loại cột cho từng phép nghiên cứu và phân tích ví dụ như : khi chạy các dạng pha động có pH cao quáchúng ta nên dùng các loại cột chuyên được dùng hoặc điều tra và nghiên cứu lại pha động để mang lại kết quảtốt nhất. Đối với yếu tố mạng lưới hệ thống, tất cả chúng ta cần liên lạc với sevice để có sự hổ trợ hài hòa và hợp lý, kịp thời. Hoặcnặng hơn là lựa chọn lại dòng loại sản phẩm HPLC tốt hơn thay thế sửa chữa. Lời khuyên là tất cả chúng ta nênsử dụng các mạng lưới hệ thống HPLC có tiếng tăm như bên 2H phân phối hệ HitachiChromaster, Hitachi Primaide hoặc của các hãng có tiếng khác. Áp suất [ tiếp theo ]. Khi bạn hoài nghi áp suất mạng lưới hệ thống của mình tăng cao do cột sắc ký, rất hoàn toàn có thể cột sắc ký củabạn đã bị nhiễm bẩn và cần phải được vệ sinh hài hòa và hợp lý. Sau đây là các bước triển khai vệ sinhcột sắc ký của bạn. Đầu tiên bạn thực thi hòn đảo đầu cột và rửa cột bằng chính pha động bạn đang chạy mẫu. Việclàm này giúp bạn hoàn toàn có thể rửa những vết bẩn đã bám lên trên màng lọc ở đầu vào của cột. Đôikhi những vẫn đục lơ lửng trong mẫu cũng hoàn toàn có thể làm bẩn và nghẹt màng lọc ở đầu cột củabạn và đó là nguyên do gây ra hiện tượng kỳ lạ tăng áp trên mạng lưới hệ thống của bạn. Nếu sau khi hòn đảo đầu cột mà áp suất vẫn cao. Điều này chứng tỏ cột của bạn đã bị nhiễm bẩn [ do tủa của mẫu hoặc pha động bên trong cột, do các hợp chất hấp thụ quá sâu vào trong cột, … ]. Chúng ta triển khai rửa cột với các pha động theo thứ tự tăng dần độ phân cực. Bảng bêndưới liệt kê list các dung môi hữu cơ theo thứ tự tăng dần độ phân cực. Lưu ý : Dùng tối thiểu là 25 mL của mỗi dung môi để rửa cột. Quá trình rửa cột sẽ tốn thời hạn khá lâu và bạn nên triển khai nó trong chính sách offline. Cũng như bạn nên dự trù trước thời hạn để sắp xếp việc làm của bạn. Nếu các bạn triển khai rửa cột bằng các dung môi có độ phân cực thấp như Hexane hayMethylene Chloride thì tất cả chúng ta bắt buộc phải liên tục rửa cột qua Isopronanol rồi mới được sửdụng với pha động có độ phân cực cao hơn. Một số người cho rằng tất cả chúng ta nên sửa chữa thay thế màng lọc bên trong của cột để cải tổ tình hìnhtạp bẩn của cột. Nhưng xin thưa, việc làm đó vô cùng khó khăn vất vả cũng như cần phải có đầy đủthiết bị, dụng cụ để tất cả chúng ta mở và thay màng lọc của cột. Với cấu trúc như vậy thì việc sửa chữa thay thế màng lọc của cột sắc ký lỏng là rất khó. Vì vậy thay vìchúng ta thao tác khó khăn vất vả, tất cả chúng ta hãy làm những giải pháp phòng ngừa để ngăn chặnviệc nghẹt cột xảy ra thì sẽ dễ hơn nhiều. Mẹo : Kỹ thuật phòng chống hiện tượng kỳ lạ nghẹt cột – rẻ mà hữu hiệu : 1. Sử dụng bảo vệ cột : gồm có mạng lưới hệ thống lọc dây pha động, bộ bảo vệ cột. 2. Lọc mẫu cho mỗi lần nghiên cứu và phân tích. 3. Lọc pha động cho mỗi lần nghiên cứu và phân tích. Đây là những giải pháp thuận tiện, rẻ nhưng vô cùng thuận tiện giúp hạn chế tối đa hiện tượngnghẹt cột trong mạng lưới hệ thống HPLC.Áp suất. Trong sắc ký lỏng hiệu năng cao thì áp suất có ảnh hưởng tác động rất nhiều đến giá trị nghiên cứu và phân tích. Bêncạnh đó nếu xét về mặt kỹ thuật thiết bị thì áp suất ảnh hưởng tác động lớn đến tuổi thọ của thiết bị. Vìvậy khi gặp các rắc rối về áp suất thì tất cả chúng ta cần phải xử lý nó 1 cách tổng lực. Khi nói đến yếu tố áp suất thì tất cả chúng ta sẽ gặp các hiện tượng kỳ lạ sau : 1. Áp suất quá cao so với thông thường : đây là yếu tố thường gặp nhất ở các phòng kiểmnghiệm. Với hiện tượng kỳ lạ này sẽ làm cho tuổi thọ của thiết bị tất cả chúng ta bị giảm [ các đường ống, van đóng mở, flow-cell, … ], cột bị giảm tuổi thọ, … Ngày nay các mạng lưới hệ thống HPLC đều có hệthống bảo đảm an toàn của riêng nó vì thế khi gặp việc áp quá cao thiết bị sẽ tự ngắt bảo vệ an toànthiết bị. Nhưng như vậy sẽ làm giảm hiệu suất thao tác của phong kiểm nghiệm. Thử nghĩ, tất cả chúng ta lên mẫu xong, định sẽ chạy qua đêm nhưng vì áp suất tăng bất thần làm mạng lưới hệ thống bịngừng. Thế là sáng hôm sau mình phải chạy lại từ đầu. 2. Áp suất thấp hơn so với thông thường : đây cũng là 1 yếu tố thường gặp ở các phòngkiểm nghiệm [ dù ít khi gặp hơn ]. Vấn đề này có 2 nguyên do chính : thứ nhất là do lỗi củakiểm nghiệm viên – thiết lập bơm không đúng như quy trình tiến độ ; thứ hai là do mạng lưới hệ thống bị rò rỉ ởđâu đó. Ở nguyên do do kiểm nghiệm viên, tất cả chúng ta hãy kiểm tra lại quy trình tiến độ và thiết lậpcủa máy. Ở nguyên do thứ hai, mọi thứ sẽ khó hơn. Chúng ta phải kiểm tra trên phần mềmcủa máy xem có báo rò rỉ ở đâu module nào không – ở các dòng máy của Hitachi đều có trangbị tính năng này. Sau đó kiểm tra đường ống ở từng module, mở màn từ bơm, lên đếnautosampler, column oven. Đôi lúc tất cả chúng ta phải nhờ đến tương hỗ kỹ thuật bên nhà sản xuất – với dòng Chromaster và mẫu sản phẩm cung ứng bởi công ty 2H thì các bạn sẽ được tương hỗ trongvòng 24 giờ từ lúc có sự cố – để tìm hiểu và khám phá chổ rò rỉ ở đâu. Nhận biết nguyên do gây ra áp suất cao và phương hướng xử lý : Kiểm tra áp suất của mạng lưới hệ thống khi có cột và khi không có cột trong mạng lưới hệ thống. Chúng ta thử gỡcột ra và thay thế sửa chữa bằng ống mao quản và theo dõi áp suất của mạng lưới hệ thống. Điều này giúp ta pháthiển ra mạng lưới hệ thống đang bị nghẹt do mạng lưới hệ thống bên trong hay là do cột. Nếu sau khi gỡ cột ra mà áp suất mạng lưới hệ thống vẫn cao. Có thể là mạng lưới hệ thống đường ống đã bịnghẹt. Chúng ta cần liên lạc với bảo dưỡng của hãng để hoàn toàn có thể đưa ra cách vệ sinh tốt nhất chomáy. Lưu ý rằng khi bên bảo dưỡng của hãng xuống sữa chửa, tất cả chúng ta cần nhờ họ hướng dẫnchúng ta biết cách để sau này hoàn toàn có thể xử lý yếu tố tựa như. Nếu gỡ cột ra mà áp suất mạng lưới hệ thống giảm xuống. Điều này chứng tỏ cột của chúng tađang gặp yếu tố. Bản thân tôi là 1 kiểm nghiệm viên, tôi hiểu cảm xúc của bạn khi gặp phải những yếu tố vềhệ thống sắc ký của mình. Từ những yếu tố đơn thuần như áp suất không đạt, máy báo lỗi chođến kết quả nghiên cứu và phân tích không đạt … Dựa vào những tài liệu sẵn có cùng với kinh nghiệm tay nghề củamình, sau chuỗi bài về Chromaster tôi ra mắt tiếp bài về những mẹo vặt thường dùng trongphân tích sắc ký lỏng hiệu năng cao. Việc tiên phong bạn phải nhớ đó là đừng tá hỏa ! Những cái máy HPLC thế hệ mới đều có mạng lưới hệ thống tự bảo vệ của riêng nó nên đừng hoảng hốtkhi máy báo lỗi. Thay vì tá hỏa, bạn hãy vấn đáp những câu hỏi theo trình tự sau đây : 1. Hệ thống của mình đang quản lý và vận hành có tương thích với mẫu sử dụng ? Mẫu của mình cóđảm bảo hay không ? 2. Kiểm tra lại quy trình tiến độ triển khai của mình : 1. Quy trình có thực thi đúng chưa ? 2. Thiết bị của mình đã được thiết lặp tương thích chưa ? 3. Kiểm tra thêm các thông tin : 1. Lần cuối mạng lưới hệ thống hoạt động giải trí có đúng hay không ? 2. Có điều gì biến hóa trong đó hay không ? 4. Xem lại hết các yếu tố tổng quát : 1. Đôi lúc tất cả chúng ta không phải luôn có nguyên do rõ ràng. 2. Có phải đã có 1 điều gì [ dù nhỏ nhất ] đã đổi khác trong mạng lưới hệ thống phải không ? Đôi lúc chỉ những câu hỏi đó thôi đã giúp tất cả chúng ta tìm ra được câu vấn đáp cho sự cố củamình ! Các đặc thù chung : với các dòng đầu dò 5410 / 5420 / 5430, Hitachi đưa ra lựa chọn sử dụngloại flow-cell không thay đổi nhiệt độ. Như tất cả chúng ta cũng biết tác động ảnh hưởng của nhiệt độ lên kết quảphân tích là rất lớn. Vì vậy việc ổn nhiệt cho cả mạng lưới hệ thống là thiết yếu. Chính do đó Hitachi đưalựa chọn flow-cell ổn nhiệt cho Chromaster. Với sự không thay đổi nhiệt của flow-cell, giúp giảmthiểu sự tác động ảnh hưởng của nhiệt độ thiên nhiên và môi trường. Kết quả mang lại đó chính là sự không thay đổi củađường nền và từ đó cải tổ độ an toàn và đáng tin cậy của phép đo. Đầu dò của các dòng này mặc định được đính kèm với các đèn Hg nhằm mục đích kiểm tra bước sóngvùng UV cho các detector trong HPLC. Các đèn Hg này phát ra bước sóng vô cùng ổn địnhgiúp cho kết quả thu được từ mạng lưới hệ thống là rất đáng tin cậy. Ngoài ra với năng lực chịu đựng vật lýcao nên các đèn Hg này có tuổi thọ bền vững và thời hạn sử dụng lâu bền hơn. Với mỗi đầu dò khác nhau, Hitachi đều mang lại những lựa chọn tiện ích cho mạng lưới hệ thống củamình. Điều đó giúp cho việc khuynh hướng ứng dụng của thiết bị là thuận tiện hơn rất nhiều. Đồngthời giúp doanh nghiệp giảm ngân sách cho những ứng dụng không cần đến. Là trưởng phòng của 1 phòng quản trị chất lượng, đã khi nào bạn gặp khó khăn vất vả khi muốn biếtcây cột sắc ký của mình đã được sử dụng như thế nào ? Để vấn đáp cho nhu yếu đó bắt buộc bạnphải có 1 mạng lưới hệ thống sổ sách để quản trị cột sắc ký của mình. Sẽ mất nhiều thời hạn của bạn vàcủa nhân viên cấp dưới bạn để trấn áp những chiếc cột sắc ký đó. Hiểu yếu tố đó, Chromaster cungcấp lựa chọn mạng lưới hệ thống quản trị cột trải qua thẻ tag kèm theo bộ ổn cột cơ bản. với hệ thốngthẻ tag này, tất cả chúng ta hoàn toàn có thể thuận tiện truy xuất thông tin của cột [ gồm cột của hãng nào, loại gì, sử dụng bao lâu, thường dùng với method nào, … ]. Ngoài ra bạn còn hoàn toàn có thể thuận tiện liên kết thẻ tag trên cột với cổng liên kết USB trên máy tính đểcó thể trấn áp thực trạng sử dụng cột. Điều này rất có ích so với 1 số phòng kiểm nghiệm, QC của các công ty dược. Theo GMP và GLP họ cần quản trị thiết bị qua Logbook viết tay thìgiờ hoàn toàn có thể thuận tiện quản trị cột bằng cách này thay vì lật từng trang Logbook ra xem lịch sửdùng cột. Trong một số ít phản ứng nghiên cứu và phân tích người ta có nhu yếu phải chạy cột tiền giải quyết và xử lý trước rồi sau đómới triển khai chạy sắc ký nghiên cứu và phân tích. Để phân phối điều này, Hitachi mang lại lựa chọn hệ thốngcột tiền phản ứng trong hệ ổn cột của Chromaster. Với bộ phận này, tất cả chúng ta sẽ có 1 valvegồm 6 cổng, 2 vị trí và hoàn toàn có thể lựa chọn bất kể 1 cột tiền giải quyết và xử lý nào. Trong 1 số ít quá trình nghiên cứu và phân tích [ theo USP, EP, BP, ISO, … ] thì yếu tố nhiệt độ của cột phântích cũng được đề cập rất nhiều. Đặc biệt trong sắc ký lỏng ion thì yếu tố nhiệt độ được đặtlên số 1 vì nó tác động ảnh hưởng trực tiếp đến kết quả nghiên cứu và phân tích. Chính do đó việc cần có 1 bộổn nhiệt cho cột sắc ký là thiết yếu. Ngày nay thì hầu hết các nhà sản xuất sắc ký đều có bộ ổncột với các công nghệ tiên tiến tối ưu cho riêng mình. Nhưng làm thế nào để lựa chọn thì cần có nhữngsuy xét kỹ hơn về những tiện ích mà nhà phân phối mang lại. Tiếp theo về chuỗi bài giới thiệudòng loại sản phẩm HPLC Chromaster của Hitachi, tất cả chúng ta sẽ được tìm hiểu và khám phá về những tiện íchmà Hitachi mang lại cho doanh nghiệp của mình. Như bài đợt trước tất cả chúng ta đã đề cập đến việc khắc phục hiện tượng kỳ lạ cary-over, hôm naychúng ta sẽ liên tục tìm hiểu và khám phá sâu thêm về những ưu điểm của dòng thiết bị này. Bên cạnh việc triệt tiêu tối đa hiện tượng kỳ lạ carry-over trên autosampler, Hitachi còn cải thiệnlại mạng lưới hệ thống tiếp xúc giữa autosampler và bộ phận liên kết TT [ máy tính ] nhằm mục đích manglại vận tốc tiêm mẫu và lấy mẫu nhanh nhất hoàn toàn có thể. Nếu như trước kia với các dòng máy cũnhư L-2000 hay L-7000 thì việc ngồi chờ hơn 3 phút để máy tiêm mẫu gặp hoài như cơm bữathì nay với Chromaster mọi thứ trở nên cực kỳ nhanh gọn. Chỉ khoảng chừng 30 giây là thiết bị đãhoàn thành quy trình tiêm mẫu – một số lượng cực kỳ ấn tượng so với các dòng máy săc kýlỏng hiệu năng cao thời nay .

Source: //cachlam247.net
Category: Cách làm